WB实验不会做？一出结果就翻车？

明明都是按照实验步骤勤勤恳恳做下去，为什么western blot一出结果就翻车？在筛选WB图时，是否时常发现一些奇奇怪怪的结果？其中实验中各种造成的污染是这些「怪图」产生的一大原因！

1. 试剂污染

结果：可能导致抗体结合到封闭剂，出现黑点或者黑斑

解决：使用短时间内配置的试剂；过滤封闭液；选用其他类型的封闭液

2. 抗体污染

结果：出现非特异性条带

解决：更换出现问题的一抗或者二抗；或者适当延长洗涤时间，或增加洗涤次数

3. 细胞污染

结果：细胞样品的交叉污染、分化和传代次数过多，都会使蛋白的表达谱发生变化而出现杂带

解决：筛选细胞来源（拒绝来路不明细胞）；规范细胞传代的各个步骤，避免细胞交叉感染；控制细胞的传代次数，不同细胞传代次数上限不定

4. 操作污染

结果：出现非均一性的背景

解决：复盘出现可能出现问题的那一环节，重做

5.细菌污染

结果：凝胶染色不均匀

解决：4℃保存抗体并使用新鲜的缓冲液浸泡凝胶；确保在振荡孵育时抗体充分浸没膜

6.缓冲液污染

结果：导致图片出现高背景

解决：使用新的缓冲液，过滤缓冲液

当然，除了WB污染问题，我们在进行科研实验的时候需要注意的地方还有很多，遇到难题不用慌，医思倍来帮您！

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